選擇AAV血清型應(yīng)根據(jù)目標(biāo)細(xì)胞類型和組織來決定。例如，AAV2常用于肝臟、AAV8適用于肌肉、AAV9適用于心臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)。通過參考文獻(xiàn)或初步實(shí)驗(yàn)，確定最適合的血清型。

AAV滴度可以通過多種方法測(cè)定，如實(shí)時(shí)PCR、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、病毒斑形成單位（PFU）測(cè)定等。選擇合適的方法應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求和實(shí)驗(yàn)室設(shè)備條件。

可能原因：

1. 蛋白翻譯后修飾復(fù)雜，細(xì)胞未能正確處理而導(dǎo)致蛋白被降解

2. 蛋白質(zhì)含有特殊序列（如高度重復(fù)序列），導(dǎo)致蛋白表達(dá)低或不正常

3. 表達(dá)系統(tǒng)不合適

哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)體系可表達(dá)的蛋白大小范圍通常在10 kDa到150 kDa之間。

桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能夠表達(dá)具有完整生物學(xué)功能的蛋白質(zhì)，適合容納和表達(dá)較大的外源片段，是表達(dá)大片段DNA的理想選擇。

雖然桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)不具備哺乳動(dòng)物細(xì)胞的所有翻譯后修飾能力，但它能夠進(jìn)行一些基本的翻譯后修飾，如糖基化和磷酸化，適合大多數(shù)功能研究和生產(chǎn)應(yīng)用。

酵母表達(dá)系統(tǒng)兼具原核和高等真核系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)，具有培養(yǎng)條件普通、生長(zhǎng)速度快、成本低、可進(jìn)行蛋白翻譯后加工、易獲得可溶性活性重組蛋白等特點(diǎn)。

巴斯德畢赤酵母因其快速生長(zhǎng)、商業(yè)化表達(dá)載體豐富和高效分泌表達(dá)的優(yōu)點(diǎn)，成為酵母表達(dá)重組蛋白的優(yōu)先選擇。

原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)（如大腸桿菌）具有快速、高產(chǎn)量、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠等優(yōu)勢(shì)，適用于大規(guī)模蛋白生產(chǎn)。

可以采用密碼子優(yōu)化、改變表達(dá)宿主菌株、調(diào)整表達(dá)條件（如溫度、培養(yǎng)基組分等）等方法來提高可溶性蛋白的表達(dá)水平。

在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中，部分外源蛋白可能會(huì)由于錯(cuò)誤折疊而形成包涵體，主要原因包括外源蛋白的復(fù)雜結(jié)構(gòu)或毒性。

1. 提高蛋白表達(dá)量：密碼子優(yōu)化可以顯著提高外源基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)量，為后續(xù)的分離純化等步驟提供便利。

2. 提高翻譯效率：通過減少稀有密碼子的使用，可以避免翻譯過程中的瓶頸，提高整體的翻譯效率。

3. 改善mRNA穩(wěn)定性：優(yōu)化后的mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，有利于核糖體的結(jié)合和翻譯過程的順利進(jìn)行。