CRISPR-Cas9技術(shù)利用短RNA(gRNA)來引導(dǎo)核酸酶(Cas9)到達(dá)DNA靶點(diǎn)。該技術(shù)使用簡單而且擴(kuò)展性強(qiáng),已被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室研究、生物醫(yī)學(xué)研究、動植物基因工程等領(lǐng)域。包括建立各種遺傳修飾的模式生物模型、建立基因調(diào)控(如敲除、插入、抑制、激活)細(xì)胞系、動植物育種、遺傳疾病修復(fù)、癌癥等重大疾病治療以及相關(guān)藥物靶點(diǎn)篩選等。
泓迅生物提供sgRNA質(zhì)粒構(gòu)建服務(wù),針對不同物種(動物、植物等)提供多種質(zhì)粒構(gòu)建方案,匹配實(shí)驗(yàn)所用材料,提高質(zhì)粒構(gòu)建的成功率,為您提供快速、優(yōu)質(zhì)的sgRNA載體構(gòu)建服務(wù)。
步驟 | 服務(wù)內(nèi)容 | |
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明確物種和載體 | 不同物種不同載體 | |
設(shè)計(jì)靶點(diǎn) | 一般在不同轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的共同外顯子上設(shè)計(jì)3-5個靶點(diǎn),盡可能破壞重要的domain和所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物isoform。 | |
合成 | 合成前確認(rèn)檢測靶點(diǎn)是否存在SNP(如果存在SNP,則不能用T7E1酶檢測是否存在突變) | |
靶點(diǎn)切割活性檢測 | 293T細(xì)胞內(nèi)檢測SSA活性 | 酶體外切割活性驗(yàn)證(推薦) |
內(nèi)源活性驗(yàn)證 (有條件選擇) |
若目的細(xì)胞轉(zhuǎn)染率高,如293T細(xì)胞,可轉(zhuǎn)染72h后提基因組,擴(kuò)增靶序列,T7E1酶切驗(yàn)證,進(jìn)一步測序驗(yàn)證。 |